خالص¬سازي تك مرحله¬اي آنزيم پلي¬گالاكتوروناز از قارچ Macrophomiona phaseolina پلي¬گالاكتورونازها داراي كاربرد گسترده در صنايع گوناگون مي¬باشند. خالص¬سازي اين آنزيم¬ها خصوصا به¬دليل كاربرد در صنايع غذايي، خوراك دام و داروسازي حائز اهميت است. بايد در نظر داشت كه اغلب پلي¬گالاكتوروناز (پكتيناز) هاي موجود در بازار، خالص نمي¬باشند كه اين عدم خلوص، حاكي از آلودگي و كيفيت پائين اين محصولات مي¬باشد. همچنين از آنجا كه پلي¬گالاكتورونازها فاكتور اصلي بيماريزايي توسط قارچ¬هاي فيتوپاتوژن مي¬باشند مطالعه خصوصيات بيوشيميايي، الگوي كينتيك و افكتورهاي سنتتيك و طبيعي آن¬ها، ابزاري كارآمد در جهت طراحي استراتژي منطقي براي كنترل بيماري و در نهايت، تضمين امنيت توليد محصولات كشاورزي در سطح جهاني مي¬باشد كه به¬منظور مطالعه دقيق ويژگي¬ها و حذف برهمكنش¬هاي غيراختصاصي، خالص¬سازي پلي¬گالاكتورونازهاي فيتوپاتوژن ضروري است. در اين رابطه خالص¬سازي تك مرحله¬اي آنزيم به¬لحاظ افزايش راندمان و فولد و نيز كاهش هزينه¬ پروسه خالص¬سازي بسيار حائز اهميت مي¬باشد. در اين مطالعه توليد و خالص¬سازي تك مرحله¬اي آنزيم پلي¬گالاكتوروناز خارج سلولي از قارچ Macrophomiona phaseolina صورت گرفته است. القاي توليد پلي¬گالاكتوروناز در قارچ M. phaseolina در محيط بهينه توليد صورت گرفت. پلي¬گالاكتوروناز عصاره محتوي پروتئين¬هاي ترشحي قارچ كه تغليظ شده¬ است صرفا با استفاده از يك ستون تعويض آنيوني دي اتيل آمينو اتيل سفارز (DEAE)، با اعمال شيب خطي 1-0 مولار كلريد سديم خالص¬سازي شد. پيك مربوط به فركشن 20 و 21 در محدوده¬ي نمكي 3/0 مولار كلريد سديم، داراي فعاليت پلي¬گالاكتورونازي و وزن مولكولي حدود 80 كيلو دالتون و خالص مي¬باشند. پلي¬گالاكتوروناز قارچ M. phaseolina با استفاده از روشي كه در اين پژوهش به كار رفته است تنها با استفاده از يك ستون DEAE-سفارز و در يك مرحله با راندمان، كيفيت و فولد بسيار بالا خالص¬سازي گرديده است و از آنجاكه خالص¬سازي در يك مرحله صورت گرفته از هزينه¬هاي خالص¬سازي نيز به طور قابل توجهي كاسته شده است.

خلاصه‌اي از توصيف اختراع؛ با ارائه روش كشت در بستر يكپارچه و پيشرفته، يكي از مشكلات بسيار مهم و اوليه كشت بافت مرتفع مي شود. نوآوري آن در كم كردن هزينه ها، سرعت بالاي استريل نمونه گياهي، شستشو و تزريق محيط كشت و همچنين كنترل و مديريت عوامل آلودگي است. اين سيستم بصورت يكپارچه و پيوسته مي باشد. به همين دليل بدون نياز به ظرفها و وسايل استريل گوناگون، تنها با يك بستر يكپارچه مي توان تمام فرايندهاي ذكر شده را يكجا انجام داد. ايزوله كردن هر نمونه گياهي از نمونه هاي كناري آن، يا بعبارتي قرنطينه كردن آنها در فضاي محدود، فرصتي ايجاد مي نمايد تا نمونه ها جدا از هم و بصورت كاملا مجزا، مونيتور شوند. چنين نوآوري باعث مديريت و كنترل دقيق آلودگيها مي شود. علاوه بر اين، مرحله وقت گير كشت تك تك بذرها در پتري ديش يا لوله آزمايش حذف مي شود و تمام نمونه ها، بدون جابجايي به ظرف ديگر، به فيتوترون منتقل مي شوند. همچنين مي توان با اين روش در سطح بسيار وسيعتر، اقدام به كشت بافت گياهي در فضاهاي محدود كرد و بطور چشمگير و معني داري، در هزينه هاي مواد كشت بافتي، هزينه هاي كارگري، فضا و عمليات كشت بافت صرفه جويي كرد.

زعفران (Crocus sativus L.) گياهي علفي، چندساله و متعلق به خانواده¬ي زنبقيان (Iridaceae) است. رويشگاه اوليه¬ي زعفران در ايران در دامنه¬ي كوه¬هاي زاگرس و به ويژه ناحيه¬ي الوند مي باشد. اين گياه به عنوان گران¬ترين ادويه در جهان شناخته مي¬شود. در طي سال هاي اخير بيماري پوسيدگي بنه، غلاف و برگ در مزارع زعفران استانهاي خراسان رضوي و جنوبي گسترش زيادي يافته است. مهمترين روش مديريت اين بيماري استفاده از بنه هاي سالم و عاري از باكتري مي باشد. با توجه به هزينه بر بودن روش هاي مرسوم، توليد كيت تشخيص سرولوژيكي اختصاصي بيماري پوسيدگي بنه زعفران مي¬تواند در شناسايي محصولات آلوده مورد استفاده قرار گيرد. براي ‌اين منظور جداسازي باكتري از نمونه هاي گياهي آلوده صورت پذيرفته و پس از تهيه كشت خالص اين باكتري، از سلول هاي كشته شده و فيكس شده باكتري B. gladioli براي ‌ايمني‌زايي خرگوش و توليد آنتي‌بادي اختصاصي باكتري استفاده مي¬شود. خالص سازي ‌ايمونوگلوبولين از سرم انجام گرفته و با آنزيم آلكالين فسفاتاز نشاندار مي¬شود. شناسايي نمونه¬هاي گياهي آلوده با استفاده از آنتي بادي تهيه شده در اين فرايند با روش الايزا و دات بلات صورت مي¬پذيرد. نتايج حاصله حاكي از كاركرد موثر و دقيق اين فرايند براي شناسايي بيماري در نمونه¬هاي گياهي مي¬باشد. The production process of the diagnostic kit of Burkholderia gladioli bacteria, the cause of saffron stem and shoot rot